维生素A缺乏症对犊牛骨骼发育的影响

导读：在养牛场，犊牛腿的骨骼发育不良是异常的，大多数奶牛没有胎盘。进行现场临床检查。实验室检测犊牛和牛的血清Ca，P，碱性磷酸酶和犊牛骨碱。性磷酸酶，牛和犊牛血清维生素A含量。结果表明，部分犊牛Ca，P，碱性磷酸酶含量较低，其他犊牛及以上指标均正常。所有测试的犊牛和奶牛的血清维生素A含量远低于参考值，并且处于严重的缺乏状态。通过临床检查，实验室检查和药物检查，证明犊牛腿和胎盘的骨骼发育不良是由维生素A缺乏引起的。

维生素A是一种重要的脂溶性维生素，具有多种生理功能，维持正常视力和上皮组织完整性，确保正常繁殖和正常骨骼生长发育，改善奶牛表现和牛奶质量，增强疾病。阻力等功能。石河子的一个大型养牛场报告说，一些犊牛出生时有关节肿胀。牛场刚刚被布鲁氏菌病隔离，没有检测到布鲁氏菌病。牛场的兽医怀疑小牛缺钙。在现场之后，对最近出生的犊牛进行了临床检查。结果发现，过去一个多月出生的62只犊牛中有57只有不同程度的腿关节异常，以及犊牛腿的一个或多个关节。显着肿胀，除了明显的2头，一般没有明显的跛行。其中6只成年牛有角膜云，同期有70％到80％的牛胎盘。为此，我们多次到现场进行诊断调查，并收集血液样本进行大量实验室检测。

一、材料和方法

（一）血液采集

选择大型养牛场的病犊牛分别采集血液;对应上面的犊牛收集牛血。从同一领域的其他奶牛采集血液。在血液自然凝集后，将血清离心并储存在-20℃的冰箱中以检测血清相关指标。

（二）测试仪器和试剂

1、主要检测设备

博乐550酶标仪，长光医疗仪器厂CA-958M半自动生化分析仪，沃特世1525高效液相色谱仪，2487紫外检测仪，S54紫外可见分光光度计。

2、主要试剂

血液生化检测试剂盒购自中升北孔生物科技有限公司;牛骨碱性磷酸酶（BALP）ELISA试剂盒购自R＆D Systems;西格玛维生素A标准。

（三）收集血清的测定

1、血液生化指标的检测

收集小牛和相应奶牛的血液样本，分离血清，并按照试剂手册中提供的方法测试Ca，P和ALP。

2、牛骨碱性磷酸酶的测定

按照说明书采用双抗体夹心法测定血清中牛骨碱性磷酸酶（BALP）的含量。使用酶标仪在450nm下测量吸光度（OD450），并从标准曲线计算样品中牛骨碱性磷酸酶（BALP）的浓度。

3、维生素A（VA）的测定

取上述部分新生犊牛血清，收集产后牛，围产牛和干奶牛的血清，测定血清维生素A含量。采用VA标准系列应用解决方案，测量VA为325nm，浓度为横坐标，相应的峰面积为纵坐标，计算回归方程，绘制标准曲线。测定血清样品，根据标准品的保留时间定性分析血清中的维生素，并根据标准品的浓度和峰面积定量分析血清中的维生素含量。

（四）动物尸检和细菌分离

选择腿部有明显异常关节发育的犊牛，然后进行尸体剖检。将动物器官和关节内容物接种在营养琼脂，MacConkey和血琼脂培养基上进行细菌培养。

二、结果与分析

（一）血液部分生化指标检测结果

1、从12犊牛中随机采集血样，分别检测血清Ca，P和ALP。测试结果如表1所示。

从表1 可以看出，有6 头（6/12）犊牛血清Ca 过低（本地参考值：2.1~3.1）；8 头（8/12）犊牛血清P 过低（本地参考值：1.3~2.3）；1 头（1/12）ALP 超标（本地参考值：14.5~243）。

2、采集12 头犊牛对应的母牛血液样本，分别检测血清Ca、P、ALP，检测结果见表2。

从表2 可以看出，对应的12 头（12/12）母牛血清Ca 均在正常值范围（本地参考值：1.5~3.1）；12 头母牛P 在正常参考值范围内（本地参考值：0.9~2.3）；4 头母牛血清ALP 超过正常范围（本地参考值：8.9~121）2.2 骨碱性磷酸酶（BALP）血清中含量根据R&D Systems 提供的参考值（<183.5），从表3 可以看出，2 头（2/12）犊牛BALP 超过参考值。

（二）血清中维生素A 含量

血清中维生素A 含量初生犊牛、产后牛、围产期牛、干奶期牛血清维生素A 检测结果见表4。

国外奶牛血清维生素A 参考值为250~800ng/mL，由表4 可知，随机抽取的初生犊牛、产后牛、围产期牛、干奶期牛所有血清维生素A 水平远低于参考值。

（三）细菌分离培养

通过37℃ 48h 培养，营养琼脂、麦康凯、血琼脂培养基均无细菌生长。

三、讨论

1、本试验中由于多种原因没有测定血清VD，而VD3 缺乏可使小肠吸收钙、磷减少，肾小管回吸收钙、磷减少，导致血钙、血磷降低。因此，从部分犊牛血清Ca、P 低于正常值可以推断部分犊牛存在VD缺乏的可能。当VD、Ca、P 缺乏时，动物易患佝偻病，而本试验中部分犊牛血清Ca、P 含量及Ca、P 比值均正常，故此可以判定部分犊牛骨髂发育异常并不

是由佝偻病引起的。

2、碱性磷酸酶（ALP）是一种含锌的糖蛋白，在碱性环境中（最适pH 为10 左右）可以水解各种天然及人工合成的磷酸单酯化合物底物。成骨细胞增殖可使血清ALP 升高。幼龄动物碱性磷酸酶偏高意味着动物可能患有佝偻病、软骨病等。如果犊牛患有佝偻病或软骨病，则大部分犊牛血清ALP 应高于正常值。从表1 和表2 可以看出，虽然犊牛ALP 平均值比产犊母牛高（P<0.01）,但仅有1 头犊牛血清ALP 高出本地犊牛ALP 参考值（多数国家正常值是<300）。

3、骨碱性磷酸酶（BALP）是由骨质中分泌出来的，当骨中钙盐沉淀不足时，该酶分泌增多，骨中钙盐充足时分泌就减少。血清中BALP 的高低可以筛查或辅助诊断因钙营养不良引起的骨钙化障碍。12 头犊牛中仅有2 头血清BALP 偏高，这也意味着部分犊牛骨髂发育异常的主要原因不是佝偻病或软骨病。

4、维生素A 在细胞分化和成熟中起着重要的作用，动物正常的生长发育以及维持骨骼组织和上皮组织的生长发育都需要维生素A。据目前研究，VA通过HOX 基因对幼儿生长与骨骼发育发挥重要作用。它可提高机体对氮的利用，从而促进体内蛋白

质的生物合成、细胞分裂和刺激细胞的生长。而VA缺乏可通过RARs 抑制骨骺板软骨细胞的增殖、肥大和基质物的合成，从而引起生长停滞、骨的正常塑形能力低下或丧失，出现粘多糖代谢障碍、软骨内成骨形成迟缓、骨母细胞的活性减弱、骨细胞的分化受阻，引起生长障碍。从表4 可以看出，所有检测的犊牛及成年母牛血清VA 含量均远低于参考值。当血清VA 含量低于100ng/mL 时，可认为极度缺乏，而VA 缺乏，可导致碱性磷酸酶活性下降，表现出的就是血清碱性磷酸酶含量不高，这与前面的检测结果相一致。

5、剖检的犊牛各脏器正常，右前腿部骨相对变粗，腿部关节（腕关节、跗关节）端异常变大，髋关节、膝关节、腕关节、跗关节腔内有数量不一的奶白色脂肪样物。右侧腕骨比左侧腕骨明显要大（图1）。掌骨近端关节面软骨变薄，关节面中间最凹处软骨消失，可以看到红色骨结构。经检查骨骼硬化正常。这些变化正符合了VA缺乏时对骨骼生长的特征性影响。

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